產(chǎn)品參數(shù)

產(chǎn)品名稱：AF488 酪an（XFD488 tyramide reagent）

產(chǎn)品貨號(hào)：11070

產(chǎn)品規(guī)格：200 slides

品    牌：AAT Bioquest\

儲(chǔ)存條件：在零下15度以下保存, 避免光照

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

1. 酪an信號(hào)放大（TSA）是一種特別通用且功能強(qiáng)大的酶擴(kuò)增技術(shù),可以使檢測(cè)有更高的靈敏度.

2. 免疫組織化學(xué)（IHC）應(yīng)用，使傳統(tǒng)的酶促擴(kuò)增程序足以實(shí)現(xiàn)足夠的抗原檢測(cè)。

3. 為了實(shí)現(xiàn)大的IHC檢測(cè)，酪an用熒光團(tuán)預(yù)標(biāo)記。

4.AF488酪an含有明亮的AlexaFluor®488，可以使用標(biāo)準(zhǔn)FITC過濾器套件輕松檢測(cè).

產(chǎn)品概述

適用范圍

  AF488酪an是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的熒光探針，適合標(biāo)記抗體或蛋白。應(yīng)用于細(xì)胞或組織。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供的AF488酪an。 

注意事項(xiàng):該產(chǎn)品不能進(jìn)行活體成像。

適用儀器

熒光顯微鏡  

Ex:     FITC濾波片組

Em： FITC濾波片組

推薦孔板: 黑色透明底板

濾波片: FITC濾波片組

實(shí)驗(yàn)方案
染色樣品示例

概述

1.固定/透化/阻斷細(xì)胞或組織
2.在封閉緩沖液中加入一抗
3.加入HRP偶聯(lián)的二抗
4.準(zhǔn)備酪an工作溶液，室溫下在細(xì)胞或組織中5-10分鐘



操作步驟

在沒有額外說(shuō)明的情況下，所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。


1.Tyramide原液（200X）：
將100μLDMSO加入小瓶中并充分混合。
注意：未使用的Tyramide原液可以在2-8℃下儲(chǔ)存。

2.Tyramide工作溶液（1X）：
將100μLTyramide原液加入20 mL含有0.003％H2O2的緩沖液中。
注意：Tris Buffer，pH = 7.4可用于獲得佳性能。
注意：Tyramide工作溶液應(yīng)立即使用。
注意：20 mL溶液適用于200次測(cè)試。

3.細(xì)胞固定和透化
3.1在室溫下用PBS中的3.7％甲醛或多聚甲醛固定細(xì)胞或組織20分鐘。
3.2用PBS沖洗細(xì)胞或組織兩次。
3.3在室溫下用0.1％Triton X-100溶液使細(xì)胞透化1-5分鐘。
3.4用PBS沖洗細(xì)胞或組織兩次。

4.過氧化物酶標(biāo)記
4.1任選：通過在過氧化物酶猝滅溶液（例如3％過氧化氫）中孵育細(xì)胞或組織樣品10分鐘來(lái)淬滅內(nèi)源性過氧化物酶活性。 在室溫下用PBS沖洗兩次。
4.2可選：如果使用HRP偶聯(lián)的鏈霉抗生物素蛋白，建議通過生物素阻斷緩沖液阻斷內(nèi)源性生物素。
4.3用優(yōu)選的封閉溶液（例如含有1％BSA的PBS）在4℃下封閉30分鐘。
4.4取出封閉溶液，加入在推薦抗體稀釋液中稀釋的一抗在室溫下60分鐘或在4°C下過夜。
4.5用PBS洗滌三次，每次5分鐘。
4.6向每個(gè)樣品中加入100μL二抗-HRP工作溶液，在室溫下孵育60分鐘。
注意孵育時(shí)間和濃度可根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度而變化。
4.7用PBS洗滌三次，每次5分鐘。

5.Tyramide標(biāo)記
5.1為每個(gè)樣品準(zhǔn)備并應(yīng)用100μLTyramide工作溶液，并在室溫下孵育5-10分鐘。
注意：如果您觀察到非特異性信號(hào)，可以縮短Tyramide的孵育時(shí)間。 您應(yīng)該在不同的孵育時(shí)間點(diǎn)使用陽(yáng)性和陰性對(duì)照樣品優(yōu)化孵育期。 或者您可以在工作溶液中使用較低濃度的Tyramide。
5.2用PBS沖洗三次。

6.熒光成像
6.1根據(jù)需要對(duì)細(xì)胞或組織樣本進(jìn)行計(jì)數(shù)。 AAT提供了一系列細(xì)胞核復(fù)染試劑，如表1所列。按照試劑提供的說(shuō)明進(jìn)行操作。
6.2使用具有抗褪色特性的安裝介質(zhì)安裝蓋玻片。
6.3使用適當(dāng)?shù)倪^濾器組可視化來(lái)自Tyramide標(biāo)簽的信號(hào)。