南京艾康全心分析檢測(cè)中心是一家集檢測(cè)、分析技術(shù)服務(wù)于一體的綜合性第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)。艾康全心分析檢測(cè)中心目前擁有高分辨率400M的核磁共振波譜儀,全套Agilent系列的液質(zhì)聯(lián)用儀、氣質(zhì)聯(lián)用儀、高xiao液相儀、氣相色譜儀以及各種理化分析儀器等一系列大型分析儀器。



在一定的色譜操作條件下，色譜柱的柱效可用理論塔板數(shù)或理論塔板高度來衡量。一般說來塔板數(shù)愈多，或塔板高度愈小，色譜柱的分離效能愈好。我們來通過實(shí)驗(yàn)告訴大家柱效是如何進(jìn)行評(píng)價(jià)的。



 如何對(duì)柱效進(jìn)行評(píng)價(jià)？



1、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑



儀器：高xiao液相色譜儀（帶自動(dòng)進(jìn)樣器，或配置微量進(jìn)樣器）、分析天平。 



試劑：ben、萘、聯(lián)ben（均為分析純）、甲醇（色譜純）、純凈水。



2、實(shí)驗(yàn)步驟



色譜條件：色譜柱：C18，4.6×150mm，5μm；流動(dòng)相：甲醇-水（80：20，v/v）； 



檢測(cè)波長：254nm；流速：1mL·min-1；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。

 

3、操作步驟



（1）分別精密配制含ben、萘、聯(lián)ben濃度均為約1mg·mL-1的3份對(duì)照品溶液各10mL。



（2）分別精密吸取上述對(duì)照品溶液各2mL置于10mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋，并定容至刻度，搖勻，得到含ben、萘、聯(lián)ben的混合對(duì)照品溶液。



 （3）按照上述色譜條件操作，進(jìn)樣，記錄色譜圖。

黃字藍(lán)底.jpg



計(jì)算各色譜峰的理論塔板數(shù)及各峰間分離度。



如何提高HPLC柱效？



要提高液相色譜的效率可從以下幾方面入手。以下介紹了幾種國際上流行的測(cè)量和計(jì)算柱效值的方法。



1、提高液相色譜柱柱效的方法



（1）降低移動(dòng)相的流速，但會(huì)使分析時(shí)間延長。



（2）減少固定相的量，但色譜柱中樣品的負(fù)載量也隨之減小。



（3）減小固定相的顆粒度，但不能過分，過分后色譜柱的滲透率也會(huì)減小。



（4）選用低粘度的移動(dòng)相，以利于快速傳質(zhì)，但卻不利于多組份分析。



（5）適當(dāng)提高柱溫，可降低移動(dòng)相的粘度，但柱效和分離度也隨之降低。



（6）盡量減小停滯移動(dòng)相的體積，但卻加快了移動(dòng)相的流速。



從以上介紹可看出，在色譜分析過程中，各種因素是互相聯(lián)系和制約的。只有通過對(duì)柱效值的跟zong測(cè)算，對(duì)自己分析方法不斷的研究和實(shí)踐，才能找到的工作條件。



2、對(duì)柱效值進(jìn)行跟zong測(cè)算應(yīng)注意的問題



我們也應(yīng)記住柱效值并不足以預(yù)測(cè)在所有條件下的柱性能，對(duì)大多數(shù)色譜工作者來說，柱性能指的是色譜柱用于特定分離的能力，而僅僅有高柱效并不能保證這種分離能力。



不管用什么特定的測(cè)試方法，都會(huì)有幾個(gè)參數(shù)影響柱效的測(cè)定。這些參數(shù)包括：洗脫液的成分和粘度及其線流速，測(cè)定塔板數(shù)所用的溶質(zhì)、溫度、柱長、填料裝填方式、顆粒度，還有所選用的測(cè)量和計(jì)算方法。而測(cè)量和計(jì)算方法對(duì)柱效值的確定起著極大的作用。



3、幾種測(cè)量和計(jì)算柱效值的方法



因?yàn)樯V峰是假定樣品濃度在移動(dòng)相和固定相中呈正態(tài)分布而得到的樣品譜帶分布,故常常把色譜峰型看作正態(tài)曲線來計(jì)算理論塔板數(shù)。因此計(jì)算柱效（以理論塔板數(shù)n為單位）的公式習(xí)慣上定義為：



式中tR為色譜峰的保留時(shí)間;σ2是以時(shí)間為單位測(cè)量色譜峰的偏差;a是和峰高（從測(cè)峰寬的基線量起）有關(guān)的常數(shù),ωb是峰寬,表示由色譜峰頂點(diǎn)與色譜峰兩側(cè)拐點(diǎn)處做切線與峰底基線相交兩點(diǎn)間的距離。



4、結(jié)論



假如一個(gè)色譜峰真是正態(tài)峰型，那么每種計(jì)算方法都會(huì)得到同樣的結(jié)果。然而即使一些比較理想的儀器和傾向于得到對(duì)稱峰型的溶質(zhì)，由于柱內(nèi)的槽或空隙，也會(huì)出現(xiàn)非正態(tài)峰型。所以不同的計(jì)算方法將會(huì)得到相差較大的n值。通常偏離正態(tài)模型的峰型表示為“前延”或“拖尾”。對(duì)于這些峰型，越在峰的高處測(cè)量，計(jì)算的理論塔板數(shù)值就越大（準(zhǔn)確性越低）。

 

在許多情況下，色譜工作者需要能反映整個(gè)峰型（包括拖尾）的柱效值,同時(shí)為了保證定量的重復(fù)性，也需要色譜峰很好的對(duì)稱性。這時(shí)對(duì)色譜峰非對(duì)稱性最敏感的計(jì)算方法適合。如果目的僅僅是要監(jiān)測(cè)色譜柱從di一次使用到使用壽命結(jié)束這一過程中的柱效，那么以上任何一種方法都可以,應(yīng)選擇簡(jiǎn)便的方法。