細胞名稱SPC-A-1（人肺腺癌細胞）

種屬人

年齡（性別）男

組織來源肺癌

生長特性貼壁

細胞形態(tài)上皮細胞樣

背景描述SPC-A-1細胞源自一位男性肺腺癌患者。SPC-A-1細胞是一株常用的肺癌細胞系，也被用于肺癌發(fā)病機理和抗腫瘤藥物的體外研究試驗研究；SPC-A-1細胞具有典型的上皮細胞狀形態(tài)結構。

生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃

SPC-A-1人肺腺癌細胞接受后處理

1)收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

2)請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3)棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

4)如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

5)接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們取得聯(lián)系。

SPC-A-1人肺腺癌細胞培養(yǎng)操作

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.將細胞懸液按1：2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為類；

1.細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數。

2.4min1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3.將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

SPC-A-1人肺腺癌細胞培養(yǎng)注意事項

1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2.仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3.用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)4~6小時,再取出觀察。此時多數細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常，請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們聯(lián)系，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。

4.靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內的培養(yǎng)基倒出，留6~8mL維持細胞正常培養(yǎng)，待細胞匯合度80%左右時正常傳代。

5.請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。

6.建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和Procell技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟，蹤回訪直至問題解決。