SYBR Green Master Mix

快速熒光定量PCR試劑盒（SYBR Green） 

別名：SYBR Green熒光定量PCR預(yù)混液

產(chǎn)品簡介：

本產(chǎn)品是使用SYBR® Green I嵌合熒光法進(jìn)行qPCR反應(yīng)的專用預(yù)混液。核心組分為一種新型的抗體法熱啟動(dòng)DNA聚合酶，具有特異性強(qiáng)、檢測靈敏度高等諸多優(yōu)點(diǎn)，配以針對qPCR優(yōu)化的最適Buffer，非常適合于進(jìn)行高特異性、高靈敏度的qPCR反應(yīng)。本產(chǎn)品是一種含有qPCR反應(yīng)最適濃度SYBR® Green I的2×預(yù)混液，可以在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對靶基因定量準(zhǔn)確、重復(fù)性好、可信度高。同時(shí)，優(yōu)化的預(yù)混液可縮短Real-Time PCR的反應(yīng)時(shí)間，適用于標(biāo)準(zhǔn)或快速PCR儀。 

保存條件：

收到本產(chǎn)品后， 請立即置于-20 ℃ 避光保存,一年有效。從-20 ℃ 取出使用時(shí)， 將凍存的qPCR MasterMix和ROX Reference Dye融解，然后輕輕顛倒混勻，待溶液完全均一后再行使用。如解凍后沒有使用，須徹底混勻后重新冷凍。(在解凍過程中鹽會(huì)出現(xiàn)分層現(xiàn)象，如未混勻進(jìn)行冷凍，鹽晶體的析出將會(huì)對酶造成損害)。如需一段時(shí)間內(nèi)經(jīng)常取用，可在2～8℃條件下儲(chǔ)存3個(gè)月。避免反復(fù)多次凍融。

使用說明：

一、配制 Real-Time PCR反應(yīng)體系：

1.、將所有試劑qPCR MasterMix，ROX Reference Dye，模板，引物和RNase-Free ddH2O，在室溫下溶解并徹底混勻。

2、建議置于冰上進(jìn)行Real-Time PCR反應(yīng)液的配制。

3、蓋上反應(yīng)管，輕柔混勻?？伤矔r(shí)離心，確保所有樣品均在管底。

二、進(jìn)行Real-Time PCR反應(yīng)

建議采用兩步法PCR反應(yīng)程序進(jìn)行反應(yīng)。

若模板量較低等因素導(dǎo)致擴(kuò)增效果不佳，可使用三步法程序進(jìn)行PCR反應(yīng)。

幾種常見儀器的最適ROX Reference Dye濃度見下表：

常見問題:見說明書

注意事項(xiàng)：

1、本產(chǎn)品中含有熒光染料SYBR Green I，保存本產(chǎn)品或配制PCR反應(yīng)液時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光照射。

2、如果試劑沒有混勻，其反應(yīng)性能會(huì)有所下降。使用時(shí)請上下顛倒輕輕混勻，請不要使用振蕩器進(jìn)行混勻，盡量避免出現(xiàn)泡沫，并經(jīng)瞬時(shí)離心后使用。

3、引物純度對反應(yīng)特異性影響很大，建議使用PAGE級別以上純化的引物。

4、引物終濃度為0.3 μM可以在大多數(shù)體系中獲得良好的擴(kuò)增結(jié)果。如果需要進(jìn)一步優(yōu)化，可以在 0.2-0.5 μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。

5、20 μl反應(yīng)體系中，cDNA模板的使用量一般小于100 ng，基因組DNA模板量一般小于50 ng，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物作為模板時(shí)，使用量應(yīng)不超過PCR體系終體積的20%。

        6、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。