Reactive Oxygen Species Assay Kit

活性氧檢測試劑盒

產品簡介：

活性氧檢測試劑盒是一種利用熒光探針H2DCFH-DA進行活性氧檢測的試劑盒。H2DCFH-DA本身沒有熒光，可以自由穿過細胞膜，進入細胞內后，可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH，而DCFH不能通透細胞膜，從而使探針很容易被裝載到細胞內。細胞內的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細胞內活性氧的水平。根據(jù)活細胞中熒光的產生，可以判斷細胞活性氧的含量和變化。用流式細胞儀或熒光顯微鏡可直接觀察，是一種經(jīng)典的組織或活細胞中活性氧檢測方法。

本試劑盒提供了活性氧陽性對照試劑Rosup，以便于活性氧的檢測。Rosup是一種活性氧陽性誘導藥物，濃度為50mg/mL，根據(jù)其熒光信號強度，可分析活性氧的實際水平。

本試劑盒本底低，靈敏度高，線性范圍寬，使用方便。

本試劑盒可以測定1000個樣品（以96孔板為標準）。

產品組成：

圖例：使用活性氧檢測試劑盒來顯示CHO細胞內活性氧熒光。左圖為CHO細胞用試劑盒配備的活性氧陽性對照處理；右圖為正常CHO細胞。綠色熒光表明細胞活性氧急劇增加，并能顯示其定位。

注意事項：

1、  探針裝載后，一定要洗凈殘余的未進入細胞內的探針，否則會導致背景較高。

2、  陽性對照Rosup 一般使用濃度為50ug/ml（推薦濃度50-200μM，具體依細胞類型而定）。通常刺激后0.5-4h可觀察到顯著的活性氧水平升高。對于不同的細胞，活性氧陽性對照的效果可能有較大的差別。如果在刺激后30 min內觀察不到活性氧的升高，可延長誘導時間或適當提高活性氧陽性對照的濃度。如果活性氧升高得過快，可縮短誘導時間或適當降低活性氧陽性對照的濃度。

3、  對于某些特別的細胞，實驗過程中如果發(fā)現(xiàn)沒有刺激的陰性對照細胞熒光也比較強， 可以按照1:2000-1:5000稀釋DCFH-DA，使DCFH-DA的終濃度為2-5μM，濃度過高容易出現(xiàn)非特異性染色。探針裝載的時間也可以根據(jù)情況在15-60 min內適當進行調整。

4、  活性氧陽性對照（Rosup）僅僅用于作為陽性對照的樣品，其他正常實驗樣品無需加入。

5、  探針裝載完畢并洗凈殘余探針后，可以進行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描，以確認探針的裝載情況是否良好。DCF的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜請參考上圖。

6、  盡量縮短探針裝載后到測定所用的時間（刺激時間除外），因為探針容易氧化，導致本底熒光值升高，所以建議工作液現(xiàn)用現(xiàn)配，以減少各種可能的誤差。

7、  如果定量的話需要制作標準曲線。先做一個不同濃度H₂O₂氧化DCFA熒光值，做一條標準曲線，X軸為H₂O₂濃度，y軸是熒光值，得出一個方程，再看樣品的熒光值即Y值是多少，對應的X值即對應的H₂O₂濃度。

8、  實驗組熒光值不高可能是因為有的細胞在裝載探針后細胞容易漂起來，洗細胞時實驗組會吸走一部分細胞。所以在種細胞時可以把細胞量增加一倍，這樣細胞緊密連接，貼壁比較牢，實驗組的熒光值就高了。

9、  為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

保存條件：

-20℃避光保存，有效期一年。