Annexin V-Cy5標記是美國AAT Bioquest研發(fā)的用于檢測細胞功能的探針，膜聯(lián)蛋白是鈣依賴性磷脂結(jié)合蛋白家族。跟著百螢一起來看看Annexin V-Cy5標記是怎么工作的吧！

1. 百螢 Annexin V-Cy5標記簡介和工作原理

細胞凋亡是細胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過程等方面起著十分重要的作用。 在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi)，巨噬細胞可以識別翻轉(zhuǎn)到細胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應(yīng)，而在細胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應(yīng)。 AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS高親和力特異性結(jié)合。PS 外翻發(fā)生在細胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關(guān)蛋白出現(xiàn)之前，這使得Annexin V 與PS 的結(jié)合成為凋亡早期的一種重要檢測標志事件。

2.百螢 Annexin V-Cy5標記參數(shù)

Ex(nm)   656

Em(nm)   670

分 子 量     ~36000

溶    劑      Water

存儲條件       在零下15度以下保存，避免光照

3.百螢 Annexin V-Cy5標記特點

方便：可用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測；

快速：1小時內(nèi)即可完成實驗；

準確：能準確區(qū)分活細胞、凋亡細胞和壞死細胞，并計數(shù)各群細胞的比例。

4.百螢 Annexin V-Cy5標記數(shù)據(jù)分析

      下圖是使用流式細胞儀檢測膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 450與磷脂酰絲氨酸在Jurkat細胞凋亡中的結(jié)合活性的實例。 在活的非凋亡細胞中，膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 450檢測非誘導(dǎo)細胞中的先天性細胞凋亡，其通常為所有細胞的2-6％。 在凋亡細胞中，膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 450與磷脂酰絲氨酸結(jié)合，磷脂酰絲氨酸位于細胞膜的外部小葉上，導(dǎo)致染色強度增加。

5.百螢 Annexin V-Cy5標記參考文獻

Resources-Application Notes Phenotypic and Epigenetic Mechanism of Action Determinations of Histone Methylase and Demethylase Inhibitors using Digital Widefield Microscopy
Authors: Brad Larson, Peter Banks
Journal: Experimental Biology (2017)

Targeted Magnetic Intra-Lysosomal Hyperthermia produces lysosomal reactive oxygen species and causes Caspase-1 dependent cell death
Authors: Pascal Clerc, Pauline Jeanjean, Nicolas Halalli, Michel Gougeon, Bernard Pipy, Julian Carrey, Daniel Fourmy, Véronique Gigoux
Journal: Journal of Controlled Release (2017)